1. 血素的滴定： ①取补体1ml加BBS 9ml依次稀释成1∶201∶301∶401∶501∶601∶801∶1001∶2001∶400同时取50%的溶血素0.2ml加BBS 9.8ml即为1∶100的溶血素然后继续稀释成1∶8001∶16001∶32001∶6400。 ②采取方阵排列试管纵行各管加不同浓度的补体0.1ml横排各管加溶血素0.1ml(皆应从最高稀释度加起)混匀后各管加BBS 0.2ml补体和溶血素对照管各加BBS 0.3ml最后在各管中加2%羊红细胞0.1ml。各管总量为0.5ml摇匀放37℃水箱中30min观察结果。 以完全溶血的补体和溶血素最高稀释度为各自的单位。在实际应用时溶血素用2U(3200÷2=1600)补体用2.5U(80÷2.5=32)。 
2. 正式试验： ①用V型微量反应板操作每份标本作一个试验孔。一个血清对照孔。各孔内先加BBS 0.025ml。②用稀释棒蘸取血清(0.025ml)加入第一孔旋转后移入第二孔共八孔如此可得1∶2～1∶256稀释。③按表2加入各试剂： 以小量法测定抗体的补体结合试验为例。按表14-6逐步加入各种试剂温育后先观察各类对照管应与预期的结果吻合。阴性、阳性对照管中应分别为明确的溶血与不溶血;抗体或抗原对照管、待检血清对照管、阳性和阴性对照的对照管都应完全溶血。绵羊红细胞对照管不应出现自发性溶血。补体对照管应呈现2U为全溶1U为全溶略带有少许红细胞0.5U应不溶。如0.5U补体对照出现全溶表明补体用量过多;如2U对照管不出现溶血说明补体用量不够对结果都有影响应重复进行试验。补体结合试验结果受检血清不溶血为阳性溶血为阴性。

布氏杆菌病